5 de maio de 2009

Onde colocar o brometo?

O post desta vez vai ser rapidinho, apenas para comentar algo que observei por experiencia propria e que para muitos talvez seja ja fato ha muito conhecido. A questao è de que forma usar brometo de etidio para corar geis de agarose de amostras de DNA? Ao longo dos anos, usei as 3 formas que eu conheço: (1) apos a corrida, colocar o gel em uma soluçao de brometo de etidio, (2) adicionar o brometo de etidio ao tampao de amostra e (3) adicionar o brometo de etidio ao gel de agarose, quando este começa a polimerizar. Bom, ao meu ver, a pior forma è a primeira. As bandas nunca ficam bem definidas, além de que leva mais tempo para corar e depois para descorar o excesso. O método numero 2 è ok, as bandas ficam bem definidas, no entanto, colocando o brometo no gel alèm de gerar uma boa definiçao, na minha experiencia, è bem mais sensivel! Esta fazendo muita diferença no meu caso. O unico contra è ter que manipular brometo bem concentrado sempre (soluçao de 5mg\ml), contaminar vidraria e cuba de eletroforese com o bendito, alèm de que se gasta mais brometo desta forma, mas ao menos è bem barato! Fica a dica.

9 comentários:

Diana disse...

oiê! primeira vez que visito esse blog, gostei.
Bom, qd eu estagiava no outro lab., eu aprendi a fazer o gel colocando logo o brometo, como na terceira opção que vc mencionou e a visualização era geralmente boa mesmo...nunca tentei das outras maneiras. Se eu soubesse que vc tinha essa dificuldade poderia ter mencionado isso, mas eu nunca pensei que EU poderia te dar alguma dica sobre métodos genéticos, hehe...
bj

Juliana Americo disse...

Diana, quem diria, visitando um blog de genètica! :) Pois è, eu fazia antes colocando na amostra, e fica bom tb, so è menos sensivel...e agora este fator è importante para mim. Obrigada pela visita! /_\

Fabricio disse...

Olá Juliana!
Eu também uso a última opção. Falando em contaminar com brometo, vc sabe como Descontaminar material? Ouvi dizer que é beeem trabalhoso...
E Hj em dia tem uns corantes que fazem a mesma coisa que o brometo, mas não fazem mal pra gente.
O problema é que ainda são meio caros...

Juliana Americo disse...
Este comentário foi removido pelo autor.
Juliana Americo disse...

Pois é, só eu mesmo que não tinha este costuma de colocar o brometo no gel, mas vou deixar este método só para quando eu precisar de mais sensibilidade mesmo...

realmente tem corantes menos tóxicos e mais eficientes, nós estamos em via de testar um que promete ser assim e é BARATO, vamos ver!

Quanto a descontaminação, não sei ao certo, só sei que tem uma solução na qual se deve deixar overnight...mas nao faço idéia do que seja, só me lembro que era bem escura! rs, vou dar uma pesquisada..

Anônimo disse...

Olá...

Sou Howard.
Existe uma Solução chamado Amberlit xad-400 que descontamina superficies contaminadas com Brometo de Etídeo!

Ta Aew a dica!!!

Juliana Americo disse...

Obrigada pela dica, Howard!

HB disse...

Pela minha experiência em geis de agarose a maior sensibilidade é quando coloco o brometo no gel quando polimeriza...

Outra alternativa ao brometo é o GelRed(Biotium).Tem uma sensibilidade semelhante ou igual ao brometo e a grande vantagem é que não é mutagénico!

Juliana Americo disse...

Não conheço o GelRed, mas estou usando um outro corante alternativo ao brometo de etídio também. Chama-se Blue Green Loading Dye I. É misturado com a amostra e funciona direitinho. É mais sensível que brometo.